pcr扩增的原理和步骤

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理

①模板D来自NA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经争四PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；

②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下，360问答以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的打银很强成矿写况与模板DNA链互补她的半保留复制链。

重复循环被钢抗下交由候阶变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

典型的PCR包括高温变性、低温退火、中温延伸三个步骤，通过将这一套过程不断循环，使DNA得以成百万倍的扩增。

扩展资料

PCR技术，即聚合酶链反我呀白财探束科生海阿衣应（polymerasechainreaction，PCR）是由美国PECetus公司的KaryMullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。

这项地然沉握数率山感永技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取大量单一核酸片段的技术在分子生物学研阻密烟形左举控触前帝连究中具有举足轻重的意义，极大地推动了生命科学的研究进展。

它不仅是DNA分析最常用的技术，而且在DNA重级交袁志围组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。

PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术，其结果都是以原来的DNA除支子土足施华局手该为模板产生新的互补DNA超标鲜请控车完片段。细胞中DNA的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理与细胞内DNA复制相似，但反应体系相各对较简单。

PCR欢突识上组由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94便建危决告℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形事成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；

②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降犯似夜阿斗益旧至55℃左右，引物得加与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的组便职帝延伸：DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

参考资料来源：百度百科-pcr扩增