急求:米氏方程推导过程。
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米氏方程
v=Vmax[S]/(Km+[S],这个方程称为Michaelis-Menten方程,是在假定存在一个稳态反应条件下推导出来的,其中Km值称为米氏常数,Vmax是来自酶被底物饱和时的反应速度,[S]为底物浓度。由此可见Km值的物理意义为反应达到1/2Vmax的底物浓度,单位一般为mol/L,只由酶的性质决定,而与酶的浓度无关。可用Km的值鉴别不同的酶。当底物浓度非常大时,反应速度接近于一个恒定值。在曲线的这个区域,酶几乎被底物饱和,反应相对于底物S是个零级反应。就是说再增加底物对反应速度没有什么影响。反应速度逐渐趋近的恒定值称为最大序否天盟意秋协道反应速度Vmax。对于给定酶量的Vmax可以定义为处于饱和底物浓度的起始反应速度n。对于反应曲360问答线的这个假一级反应区的速度方程可写成一种等价形式:
n(饱和时)=Vmax套烟德著=k[E][S]0=k[E]total=kcat[ES]
速度常数k等于催化常数许kcat,kcat是ES转化为游离的E和产物的速度常数。饱和时,所有的E都是以讨际ES存在。方程(3.2)中还有另一个简单的关系式:Vmax=kcat[E]total。从中得出:kcat=Vmax/[E]total。kcat的单位是s-1。催化常数可以衡量一个酶促反应的快慢。
米氏常数Km是酶促反应速度n为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度。这可通过用[S]取代米氏方程中的Km证明,通过计算可得n=Vm候洋ax/2。
Km和Vmax拿配难马某读轮迫的意义
①当ν=Vmax/2时,Km=[S]。因此,Km等于酶促反应速度达最办座阶先英守或历大值一半时的底物胡齐肉门从浓度。
②当k-1>>k兵吃农皇孩费空里+2时,Km=k-1/k+1=Ks。因此,Km可以反映酶与底物亲和力的大小,即Km值越小,则酶与底物的亲和力越大;反之,则越小。
③Km可用于判断反应级数:当[S]<0.01Km时,ν=(Vmax/Km)[S],反应为一级反应,即反应速度与底物浓度成正比;当[S]>100Km时,ν=Vmax,反应为零级反应,即反应速度与底物浓度无关;当0.01Km<[S]<100Km时,反应处于零级反应和一级反应之间,为混合级反应。
④Km是酶的特征性常数:在一定条件下,某种酶的Km值是恒定的,因而可以通过测定不同酶(特亲常牛划烧历旧爱别是一组同工酶)的Km值,来判断是否为不同的酶。
⑤Km可用来判断酶的最适底物:当酶有几种不同的底物存在时,Km值最小者,为聚当移右派月该酶的最适底物。
⑥Km可用来确定酶活性测定时所需的底物浓度:当[S]=10Km时,ν=91%Vmax,为最合适的规浓吸春测定酶活性所需的底物浓度。
⑦Vmax可用于酶的转换肥片家卷半粒数的计算:当酶的总浓度和最大速度已知时,可计算出酶的转换数,即单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。
⑷Km和Vmax的测定:主要采用Lineweaver-Burk双倒数青止行直状容斤改作图法和Hanes作图法。