氯化钙制备感受态细胞的原理
的有关信息介绍如下:用氯化钙溶液制取感受态细胞的原理是:氯化钙溶液可使得细胞膨来自胀,细胞膜磷脂双分支层形成液晶结构,使细胞的通透性变大,便于外源基因或载体进入感受态细胞。
序政守距具体原理如下:
将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时钙离子会使细胞膜磷脂双承球谈保普那分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开亚亮渐责来。
离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞细胞膜通透性发生变化,极易与外源DNA相360问答粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。
扩展资料
用氯化钙法制取感受态细胞的具体程序为:
1、将故住引价著宗孩快速生长的大肠杆庆京理则标载德材今若院菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞。
2、细胞膜通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。
3、联合其它的二价金属离子(如Mn、Co)、DMSO或还原剂等物质处明训依混孙祖每简端理细菌,则可使转化连少易率提高100~1000倍。
4、此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现济阻盟事超迅责刘散合遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
5常调句例雨修必得妒儿、将转化后的细胞在洲今述助烟于助八选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。
参考资料来源:百度百封当场滑攻娘科-感受态细胞