冈崎片段

冈崎片段

问题补充说明：生物学上

我不会，抄了来自一段，将就看吧。。

冈崎片段(Okazakifragment):相对比较短的DNA链(大360问答约1000核苷酸残基)，是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段，这是ReijiOkazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的。

DNA复制过程中,2条新生链都只能从5端向3端延伸,前导链连续合成,滞后链分段合成.这些分段合成的新生DNA片段称冈崎片段.细菌冈崎片段长度1000-2000核苷酸,真核生物冈崎片段长度100-200核苷酸.在连续合成的前导链中,U-糖苷酶和AP内切酶也会在错配碱基U处切断前导链.

任何一种DNA聚合酶合成方向都是从5'向3'方向延伸，而DNA模板链是反向平行的双链，这样在一条链上，DNA合成方向和复制移动方向相同(前导链)，而在另一条模板上却是相反的(后滞链)。那么在复制叉中新链是如何合成的呢?1968年冈崎(Ok通训命缺azaki)及其同事进行了一系列实验，回答了这一问题。

他们做了两组实验，一居坏华执组是脉冲标记实验(pulse-labelingexperiment)。士坐最以E.coli为材料，在培养时，培养基中加入同位素[3H]标记的dT书动克台础TP，经30秒后，DNA刚开始复制，分离DNA，然后在碱中沉淀，变性，让新合成的单链和模板链分开，再用CsCl密度梯度离心，以沉降的快养鲜啊培十似穿八慢来确定片段的大小，再检测放射标记，结果表明被3H标记的片段，也就是新合成的片段立，沉淀系数为20S左右，即都是长1000~2000Nt的DNA片段，而亲本链要比它大20~50倍;第二组实验是脉冲追逐实验。目的是检测早期合成的DNA片段以后的命运又是如何的?是依然如旧的短片段，还是连接成了长片段。临质结态采剂婷新源火这个实验是先进行标记培养30秒，以后除去同位素继续培养几分钟，再分离DNA在碱中沉淀，检测结果。先合成的(带标记)模宣成么东曾乱的DNA不再是短片段，而和总DNA的情况相似，沉号领照再容仅穿座粒淀系数为70S~120S较长的片段，这意味着刚开始合成的片段都是短片段，以后再连接成长片段，人们就把最初合成的短片段称为冈崎片段(Okazakifragme蒸需财云nt)。

由于这个实验的结果使得人们普遍认为:无论是前导链还是后滞链都是先合成小片段，然后在连成大片段，称为“不连续复制“(discontinuousreplication)。然而由模型预测应该只有一半放射标记存在于小片段中，但实验的结果却全部是小片段DNA，为什么从前导链模测含联地征属板的3′-OH端延伸会不连续合成呢?人们在思考这个问题。1978年Olivera提出了半不连续(semidiscontinuous)复制模型，也就是说前导链上的合成是连续的，只有后滞链上的合成才是半连续的。现在已经弄沉使围我溶清原来是由于细胞内都存在有外集坚dTTP和dUTP，而DNApolⅢ却并不能区分它们，因此也会将dUTP加入到DNA中，形成A·U对。那么在DNA中为什么没有U的存在呢?这是因为E.coli细胞里有双重“保险”，防止了U的“混入”。第一道关是细胞里的dU助此百政否又更菜吧TPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。但总还有些漏网之“鱼”，它们还是逃过此关，混入DNA中，这就靠第二道关来清除“异己”，初固取课买即告肉还画这道关的主角是尿嘧啶N-糖苷酶(uracilN-glycosylase)，它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点(地欢冷意吸金婷斯apurinicorapyrimidinic，AP)，再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。在细讲天端笔社责气绿胞内尿嘧啶N-糖苷酶作用较快，而AP酶作用较慢，在新链合成之初约1200bp就有可能掺进一个U，但很快就被尿嘧啶N-糖苷酶切断糖苷键，在AP酶未作用前在脉冲标记实验中就提取了，用NaOH沉淀时，AP位点十分易断裂，所以前导链也成了小片段。以下实验证实了这个解释:

(1)在dut-突变体(dUTPase缺失)中冈崎片段比在dut+中为短。这是因为U掺入机会增加;

(2)在ung-(尿嘧啶N-糖苷酶缺失)突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。这是(3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。

在dut-,ung-双突变体中，结果和实验(2)相同，更进一步证实了此推测。